現時並無醫學界普遍認可的自閉症診斷實驗室測試。醫生或專家會依靠觀察個體的行為表現，再根據《精神障礙診斷和統計手冊》 Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders (DSM) 或《國際疾病與相關健康問題國際統計分類》 International Statistical Classification of Diseases and Related Health Problems (ICD)作診斷。自閉症一般由兒科醫生、精神科醫生、腦神經科醫生或臨床心理學家，再配合其他專業人士，如言語治療師，去作出正式的診斷。所需要的醫生及專業人士會因應您居住的地區或患者的情況而不同。

根據《精神障礙診斷和統計手冊》 第五版，自閉症的診斷須符合以下條件:

1. 在多重情境中持續有社交溝通及社交互動的缺損，於現在或過去曾有下列表徵(範例為闡明之用，非為詳盡範例)：
   • 社會-情緒相互性的缺損。包含範圍如：從異常的社交接觸及無法正常一來一往的會話交談，到興趣、情緒或情感分享的不足，到無法開啟或回應社交互動。
   • 用於社交互動的非語言溝通行為的缺損，包含範圍如：從語言及非語言溝通整合不良，到眼神接觸及肢體語言異常或理解及運用手勢的缺損，到完全缺乏臉部表情及非語言溝通。
   • 發展、維繫及了解關係的缺損，包含範圍如：從調整行為以符合不同社會情境的困難到分事想像遊戲或交友的困難，到對同儕沒興趣。
     
2. 侷限、重覆的行為、興趣或活動模式，於現在或過去至少有下列二種表徵(範例為闡明之用，非為詳盡範例) :
   • 刻板的或重複的動作、使用物件或言語
     (例如：簡單的刻板動作、排列玩具或翻彈東西、仿說、奇異語詞) 。
   • 堅持同一性、固著依循常規或語言及非語言行為的儀式化模式
     (例如：對微小的變化感覺極端困擾、在面臨情境轉換的調節上有困難、僵化的思考模式、問候/打招呼的儀式化行為、每天固定路徑或吃相同食物) 。
   • 具有在強度或焦點上顯現到不尋常程度的高度侷限、固著的興趣
     (例如：強烈依戀或於不尋常的物件、過度侷限的或堅持的興趣) 。
   • 對感官輸入訊息反應過強或過低或是對環境的感官刺激面有不尋常的興趣
     (例如：明顯對疼痛/溫度的反應淡漠、對特定的聲音或材質有不良反應、過度聞或觸摸物件、對光或動作的視覺刺激著迷)
     
3. 症狀必須在早期發展階段出現(但是缺損可能到社交溝通需求超過受限能力時才完全顯現，或是可能被年長後習得的策略所掩飾)。
4. 症狀引起臨床上社交、職業或其他重要領域方面顯著功能減損。
5. 這些困擾無法以智能不足(智能發展障礙症) 或整體發展遲緩做更好的解釋。智能不足與自閉症類群障礙症常並存；在做出智能不足與自閉症類群障礙症共病診斷時，社交溝通能力應低於一般發展程度所預期的水平。

根據《精神障礙診斷和統計手冊》 第五版，自閉症可分為三個嚴重程度:

嚴重程度	社交溝通	侷限的、重複的行為
第 3 級 ｢需要非常大量的支援」	語言和非語言社交溝通技巧有嚴重缺損，造成功能嚴重減損，啟動社交互動極其有限，對别人的社交招呼反應微小。例如：某一僅有極少清晰言語者鮮少啟動互動，而當他啟動時，使用不尋常的方式去滿定需要，且只對直接的社交接觸方式有反應。	行為固執無彈性、極難因應變化，或有侷限的／重複的行為明顯阻礙所有層面的功能，對焦點或行動的改變感到非常苦惱／困擾。
第 2 級 ｢需要大量支援」	語言和非語言社交溝通有顯著缺損，即使有支援，社交功能障礙仍很明顯。啟動社交互動有限，對別人的社交招呼反應減損或異常。例如：某一有簡單語句能力者的互動侷限於狹窄的特定興趣，且伴隨顯著古怪的非語言溝通。	行為固執無彈性、難以因應變化，或有顯而易見之侷限的／重複的行為經常出現，明顯妨礙不同情境的功能。對焦點或行動的改變感到非常苦惱及／或困難。
級別 1 ｢需要支援」	在沒有支援之下，社交溝通缺陷可見造成功能減損。啟動社交互動有困難，對別人的社交招呼反應有清楚不典型或不尋常反應的例子。可能顯現對社交互動少有興趣。例如：某一有完整語句能力並能溝通者，無法與他人一來一往的會話交談，且其嘗試和別人交友的方式古怪，以致往往不成功。	行為固執無彈性造成明顯妨礙某一或更多情境的功能，活動間之轉換有困難；在組織和做計畫方面的問題，妨礙其獨立生活。